高效液相色譜系統(tǒng)使用液體作為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)將不同極性的單一溶劑或流動(dòng)相，如不同比例的混合溶劑和緩沖液，泵入裝有固定相的色譜柱中。色譜柱中的組分分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)樣品的分析。
高效液相色譜系統(tǒng)根據(jù)分離機(jī)制的不同，HPLC原理可分為離子交換色譜法、分子排阻色譜法及液液分配色譜法。
1、離子交換高效液相色譜法：
固定相是離子交換樹脂。樹脂上可電離離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的離子及被測(cè)組分的離子進(jìn)行交換，根據(jù)各離子與離子交換基團(tuán)具有不同的電荷吸引力而分離。
2、分子排阻色譜法：
分子排阻色譜法又稱凝膠色譜法，它是按照分子尺寸大小順序進(jìn)行分離的一種色譜方法。分子排阻色譜法的固定相凝膠是一種多孔性的聚合材料，有一定的形狀和穩(wěn)定性，利用分子篩對(duì)分子量大小不同的各組分排阻能力的差異而完成分離。根據(jù)所用流動(dòng)相的不同，凝膠色譜法可以分為兩類：即用水溶劑做流動(dòng)相的凝膠過濾色譜法(GFC)與用有機(jī)溶劑如THF做流動(dòng)相的凝膠滲透色譜法(GPC)。
3、液液分配色譜法：
固定相為液體，根據(jù)被分離的組分在流動(dòng)相和固定相中的溶解度不同而分離。依固定相和流動(dòng)相的極性不同可分為正相色譜法和反相色譜法。正相色譜法采用極性固定相，流動(dòng)相為相對(duì)非極性的疏水性溶劑，常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物；高效液相色譜系統(tǒng)法一般用非極性固定相，流動(dòng)相為水或緩沖溶液，適用于分離非極性和極性較弱的化合物。
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