高效液相色譜法是采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱，對供試品進(jìn)行分離測定的色譜方法。注入的供試品，由流動(dòng)相帶入色譜柱內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并進(jìn)入檢測器檢測，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理色譜信號。
高效液相色譜測定有以下方法：
1、定性分析
常用的定性方法主要有但不限于利用保留時(shí)間定性、利用光譜相似度定性、利用質(zhì)譜檢測器提供的質(zhì)譜信息定性幾種。
①利用保留時(shí)間定性
保留時(shí)間(retention time，tR)定義為被分離組分從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)該組分最大響應(yīng)值時(shí)的時(shí)間，也即從進(jìn)樣到出現(xiàn)某組分色譜峰的頂點(diǎn)時(shí)為止所經(jīng)歷的時(shí)間，常以分鐘(min)為時(shí)間單位，用于反映被分離的組分在性質(zhì)上的差異。通常以在相同的色譜條件下待測成分的保留時(shí)間與對照品的保留時(shí)間是否一致作為待測成分定性的依據(jù)。
在相同的色譜條件下，待測成分的保留時(shí)間與對照品的保留時(shí)間應(yīng)無顯著性差異；兩個(gè)保留時(shí)間不同的色譜峰歸屬于不同化合物，但兩個(gè)保留時(shí)間一致的色譜峰有時(shí)未必可歸屬為同一化合物，在作未知物鑒別時(shí)應(yīng)特別注意。
若改變流動(dòng)相組成或更換色譜柱的種類，待測成分的保留時(shí)間仍與對照品的保留時(shí)間一致，可進(jìn)一步證實(shí)待測成分與對照品為同一化合物。
當(dāng)待測成分(保留時(shí)間tR，1)無對照品時(shí)，可以樣品中的另一成分或在樣品中加入另一已知成分作為參比物(保留時(shí)間tR，2)，采用相對保留時(shí)間(RRT)作為定性(或定位)的方法。在品種項(xiàng)下，除另有規(guī)定外，相對保留時(shí)間通常是指待測成分保留時(shí)間相對于主成分保留時(shí)間的比值，以未扣除死時(shí)間的非調(diào)整保留時(shí)間按下式計(jì)算。
若需以扣除死時(shí)間的調(diào)整保留時(shí)間計(jì)算，應(yīng)在相應(yīng)的品種項(xiàng)下予以注明。
②利用光譜相似度定性
化合物的全波長掃描紫外-可見光區(qū)光譜圖提供一些有價(jià)值的定性信息。待測成分的光譜與對照品的光譜的相似度可用于輔助定性分析。二極管陣列檢測器開啟一定波長范圍的掃描功能時(shí)，可以獲得更多的信息，包括色譜信號、時(shí)間、波長的三維色譜光譜圖，既可用于輔助定性分析，還可用于峰純度分析。
同樣應(yīng)注意，兩個(gè)光譜不同的色譜峰表征了不同化合物，但兩個(gè)光譜相似的色譜峰未必可歸屬為同一化合物。
③利用質(zhì)譜檢測器提供的質(zhì)譜信息定性
利用質(zhì)譜檢測器提供的色譜峰分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)的信息進(jìn)行定性分析，可獲得比僅利用保留時(shí)間或增加光譜相似性進(jìn)行定性分析更多的、更可靠信息，不僅可用于已知物的定性分析，還可提供未知化合物的結(jié)構(gòu)信息。
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